\begin{minipage}[t]{.45\textwidth}
\parindent=30pt
Гибридные клетки с репликативно инактивированным генетическим материалом одного 
из партнеров по слиянию могут быть использованы для изучения влияния 
ядерно-цитоплазматических факторов одной клетки 
на состояние дифференцировки другой клетки. Также такие гибридные клетки 
могут найти применение в клеточной терапии, так как позволяют получить 
клетки с диплоидным набором хромосом, аутологичные клеткам пациента.

Для репликативной инактивации ДНК одного из партнёров по слиянию использовали
ДНК-сшивающий агент митомицин Ц (МЦ) (рис.~\ref{schema}). Работу проводили на клетках 
эмбриональной карциномы мыши линий P19 и PCC4aza1 (рис.~\ref{pcc-phasa}). 
Было показано, что обработка клеток P19 МЦ не препятствует образованию жизнеспособных 
гибридов с интактными клетками PCC4aza1 (рис.~\ref{hybrid}). Процент выросших колоний
после проведения слияния был довольно высоким: 1 колония на $10^4$ подвергающихся
слиянию клеток PCC4aza1. 
Обработка МЦ существенно не влияет
на эффективность образования гибридов. Это было продемонстрировано при получении 
полиплоидных гибридов между клетками PCC4aza1 и клетками P19, обработанными 
токсическим митохондриальным красителем родамином 6G (Р6G) (рис.~\ref{morpho}). 
Полиплоидные гибридные клетки были получены в условиях, сходных с условиями получения
гибридных клеток P19/МЦ$\times$PCC4aza1. 
\end{minipage}
\hfill
\begin{minipage}[t]{.45\textwidth}
\parindent=30pt
Эффективность получения клонов полиплоидных клеток
составляла 2.5 колонии на $10^4$ клеток PCC4aza1. Стоит отметить, что при получении 
тетраплоидных гибридов между клетками PCC4aza1 и соматическими клетками (спленоцитами) 
эффективность образования гибридных клонов резко падала и составляла 1 клон 
на $5\times 10^6$ клеток PCC4aza1.

Хромосомный анализ гибридных клеток P19/МЦ$\times$PCC4aza1 показал наличие в
них хромосом клеток PCC4aza1 (рис.~\ref{chromo}). Микросателлитный ПЦР анализ на
маркеры хромосом 5, 6, 8 и 14 показал, что микросателлиты гибридных клонов в
точности совпадают с микросателлитами клеток PCC4aza1 (рис.~\ref{microsat}).
Названия используемых микросателлитных маркеров и последовательности праймеров
приведены в таблице 1. Также был проведен анализ состава митохондриальной ДНК
полученных гибридных клонов с помощью аллель-специфичной ПЦР. На
(рис.~\ref{as-PCR}) приведены результаты ПЦР, указаны последовательности
праймеров и условия реакции. Приведенные данные также говорят о том, что в 
потомках гибридных клеток содержится генетический материал только одного из 
партнёров по слиянию (PCC4aza1). 

\end{minipage}
\begin{center}\large \bf Выводы\end{center}
\begin{enumerate}
\item При слиянии клеток, обработанных МЦ, с интактными клетками удается 
получить жизнеспособные гибриды.

\item В гибридных клетках отсутствует геномная и митохондриальная ДНК клеток, 
обработанных МЦ.

\item Число хромосом в гибридных клетках соответствует числу хромосом клеток 
PCC4aza1 и свидетельствует об отсутствии в них хромосом клеток Р19.
\end{enumerate}

\begin{center}
\vskip 1em
\epsfig{file=img/chromo-3.eps, width=.8\textwidth}
\vskip -.5em
\caption{Хромосомный анализ клеток линии P19 (A), клеток линии PCC4aza1 (B) и
гибридных клеток P19/МЦ$\times$PCC4aza1 (C).\label{chromo}}
\end{center}

